您好,肖大哥就为大家解答关于重组质粒的构建步骤，重组质粒的构建步骤相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧！

1、重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。

2、在国内先进的实验中，也大都是由实验员搞定。

3、但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。

4、在这里将我的心得分享于大家，这也是我本人几年来一线工作时的经验积累，以期能为谷友提供借鉴，让大家在实验中少走弯路。

5、所涉及内容如下： 1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明上述问题同时，本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。

6、 一、克隆基因的酶切位点问题 克隆位点选择的问题。

7、首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析，列出其所含酶切位点清单。

8、然后对照质粒多克隆位点，所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。

9、这是常识，不赘述。

10、 2、保护碱基数目的问题。

11、在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，这是大家所熟知的。

12、但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。

13、这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。

14、 一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DN段上。

15、如NdeI就属这类，需要加入至少6个保护碱基，常用的HindIII也要三个。

本文就讲到这里，希望大家会喜欢。